沙砾生物将在SITC 2024年会公布研究成果（2）：Cas12b技术用于制备下一代基因编辑型TIL的研究成果

当地时间11月06日至10日，2024年度的第39届癌症免疫治疗学会（SITC）年会在美国休斯敦举行。沙砾生物参加此次大会， 分享由天泽云泰AaCas12bMax技术平台支持制备下一代基因编辑型TIL的研究成果。

标题： Development of a next-generation dual-KO TIL product GT300 with AaCas12bMax nuclease.
展示编号：464
展示时间（当地时间）：Thursday, Nov. 7 & Friday, Nov. 8
展示位置：Exhibit Halls A B George R. Brown Convention Center

TIL（肿瘤浸润淋巴细胞）在黑色素瘤等多种实体瘤中显示出良好的治疗效果，并显著延长了晚期患者的生存期。然而对于一些淋巴细胞浸润较差的“冷肿瘤”来说，TIL的疗效仍有待评估和改善。开发下一代基因编辑型TIL疗法，将会是提高TIL功能的理想策略。

Cas12b是CRISPR家族中的一种效应核酸酶，在保持高效编辑效率的同时，在编辑精度上超过了目前常用的SpCas9核酸酶，可以用于有效地降低脱靶毒性，成为基因编辑应用的理想选择。在本项研究中， 沙砾生物应用天泽云泰AaCas12bMax技术，开发具有双基因敲除的下一代肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）产品——GT300。

本项目在设计AaCas12bMax的sgRNA的过程时，利用了计算机辅助预测技术，最大程度降低全基因错配的风险。后续在HEK293细胞和人PBMC T细胞中，筛选了更为优选的sgRNA，用于进一步评估其在TIL产品中的编辑效率和编辑效果。

结果显示，筛选后的sgRNA用于AaCas12bMax系统对TIL细胞进行基因敲除，具有和传统SpCas9系统类似的敲除效率。在小鼠PDX模型中，还进一步验证了AaCas12bMax基因敲除后TIL，与传统SpCas9系统相当，具有良好的细胞杀伤能力、体外细胞因子释放能力和肿瘤抑制效果。

Fig 1. AaCas12bMax编辑后的TIL产品扩增能力更强

值得注意的是，由AaCas12bMax编辑后的TIL产品，细胞扩增能力和细胞存活能力得到显著的提高，TIL扩增后产生的总细胞数增加了3-5倍。更进一步地，这些AaCas12bMax编辑后的TIL产品表现出更高的细胞干性、更低的耗竭特征和凋亡率、以及在体内回输后更强的扩增能力（Fig 1）。

这表明， 相对于传统SpCas9系统基因编辑会对TIL产品造成应激损伤，AaCas12bMax编辑损伤更小、编辑的后TIL产品能够具有更好的细胞状态。

Fig 2. AaCas12bMax编辑后的TIL产品细胞凋亡水平更低

RNA-seq组学研究进一步发现， AaCas12bMax编辑后T细胞产品的DNA修复速度更快，同时细胞凋亡低于SpCas9（Fig 2）；以及在细胞焦亡和耗竭通路异常激活等细胞状态受损方面，AaCas12bMax也相对于SpCas9编辑有所改善。

Fig 3. AaCas12bMax编辑发生的脱靶事件更少

同时，SITE-seq和GUIDE-seq分析发现， AaCas12bMax编辑后的TIL产品中的脱靶位点明显减少，脱靶效应明显降低（Fig 3）。另外通过PEM-seq进行染色体易位分析，也发现AaCas12bMax引起的染色体易位事件更少。

本次AaCas12bMax技术用于TIL编辑的结果表明， AaCas12bMax编辑能够在 TIL产品中实现高编辑效率和最小的脱靶效应，并且能够显著提高TIL产品的扩增能力、细胞活率、以及体内回输后的体内适应性。

特别感谢近岸蛋白进行AaCas12bMax工艺开发和优化，并为本研究提供酶的测试样品。

沙砾生物应用天泽云泰AaCas12bMax技术，开发了具有双基因敲除的下一代TIL产品——GT300。 目前，该产品的临床研究也正在进行，接受各类晚期不可切除或转移性实体瘤受试者评估入组；相关受试者招募、入组和临床研究工作，正持续在多家临床中心开展。

近年来，沙砾生物参展的 相关全球性会议 还包括：

在2024年的TIL Therapies Summit上，以专家座谈会和主题报告演讲等多种形式，分享肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法在更多适应症取得突破的潜力和机遇，展示公司在新一代基因编辑型TIL产品的研发进展和临床试验成果。

在2024年的美国临床肿瘤学会年会（ASCO）年会上，公布了一系列细胞治疗领域最新研究成果：TIL注射液GT101的I期临床数据，在多名晚期实体瘤患者体内表现出良好的安全性和临床疗效；全球首款膜结合IL-15复合物编辑型TIL注射液GT201的I期最新临床数据，在多名晚期实体瘤患者体内表现出良好的安全性和临床疗效，以及全球首创的CRISPR双靶点基因编辑型TIL注射液GT316，在多名晚期实体瘤患者体内表现出良好的安全性和临床疗效。

在2024年的美国基因与细胞治疗学会（ASGCT）年会上，公布了一系列细胞治疗领域最新研究成果：高通量CRISPR筛选平台ImmuT Finder®助力发现NK细胞关键免疫调控靶点、具有抗耗竭能力的双敲TIL产品GT316的临床前和临床最新数据，以及外部合作项目的最新研究成果：鉴定新型抗原呈递细胞靶向LNP用于mRNA肿瘤疫苗开发的最新数据。

在2024年的美国癌症研究协会（AACR）年会上，公布了TIL（肿瘤浸润淋巴细胞）领域两项最新研究成果：增强实体瘤疗效的新型基因编辑的TIL产品GT216、以及基于高通量CRISPR筛选平台ImmuT Finder®的下一代双敲TIL产品GT307的最新数据。

在2023年的癌症免疫治疗学会（SITC）年会上，全面展示了公司在TIL体外扩增阶段的肿瘤反应性标志物的筛选成果。

在2023年的TIL Therapies Summit年会上，公布公司高通量CRISPR筛选平台ImmuT Finder®，以及基于该平台开发的下一代双敲TIL产品--GT316的最新临床前及临床试验成果。

在2023年的美国癌症研究协会（AACR）年会上，公布公司高通量CRISPR筛选平台ImmuT Finder®，以及基于该平台开发的下一代双敲TIL产品GT316的临床前研究。

在2023年的美国临床肿瘤学会（ASCO）年会上，公司公布GT201产品的临床试验试验进展，GT201展示出稳定的扩增能力，并在多个晚期实体瘤患者体内均表现出良好的安全性和初步临床疗效。

在2023年的美国基因与细胞治疗学会（ASGCT）年会上，公司公布下一代基因编辑型TIL产品GT201产品的临床前研究成果，通过为工程化TIL疗法量身定做的逆转录病毒系统，GT201实现在多批次、不同瘤种来源的TIL细胞上稳定表达和功能提升。

在2022年的美国癌症研究协会（AACR）年会上，公布公司特有的TIL干性扩增平台StemTexp®的技术亮点，以及基于病毒工艺平台StaViral®开发的下一代TIL产品GT202。

关于沙砾生物

沙砾生物成立于2019年，是一家专注于肿瘤免疫细胞治疗，以TIL药物为代表研发管线的创新型医药公司。沙砾生物已完成多轮股权融资，得到了国内外多家知名创投基金的支持。

沙砾生物自主研发的GT101注射液是国内首个获批注册临床的TIL药物，目前进入关键二期临床试验。沙砾生物的全球首款膜结合IL-15复合物编辑型TIL产品GT201注射液，已经完成了中美临床双报。公司的核心研发平台包括StemTexp®干性TIL扩增技术平台、StaViral®病毒稳转株工艺、ImmuT Finder®免疫调节靶点发现平台、KOReTIL®高效基因敲除系统，并依托平台开发了一系列下一代基因编辑型TIL药物。沙砾生物拥有国际领先的技术储备和产业资源，旨在打造开创性的实体瘤细胞药物，为广大肿瘤病患带来新的希望。

关于天泽云泰

天泽云泰2020年3月注册成立于中国上海，致力于将前沿的基因及细胞治疗技术，转化为临床可及的治疗方法，以期造福更多患者。

天泽云泰拥有具有自主知识产权的ViVec®AAV载体筛选平台、ViLNP®脂质纳米粒技术平台、ViCas®CRISPR基因编辑技术平台和ViHiYi®AAV高产技术平台，通过基因替代、基因调控和基因编辑等策略，开发治疗中枢神经系统疾病、代谢及血液系统疾病、眼科疾病等领域的创新基因治疗药物，拥有包括多个潜在First-in-class产品的多元化管线。目前，天泽云泰已经获得多家知名基金的多轮投资，分别在张江高科技园区、北京巢生实验室、临港新片区和外高桥自贸区建成面积2,500平米的基因治疗研发运营中心、基因编辑技术研发中心、3,000平米的基因治疗中试生产车间和9,500平方米GMP商业化生产车间。

关于近岸蛋白

苏州近岸蛋白质科技股份有限公司（简称近岸蛋白）深耕重组蛋白行业十余年，是一家专注于蛋白质技术与应用解决方案的高新技术企业，主营业务为生物药、体外诊断、mRNA疫苗药物、生命科学基础研究等领域的原料与技术解决方案，包括靶点及因子类蛋白、重组抗体、酶及试剂的研发、生产和销售及相关技术服务。公司在上海、苏州和菏泽建有研发、生产基地.